木质包装松材线虫制样及木样保存方法的研究制管机

木质包装松材线虫制样及木样保存方法的研究

摘要： 本文对进境木质包装松材线虫的几种制样方法、样品量大小、分离方法，以及对有线虫木样的保存方法进行了研究。结果表明：将木样制成1-2.5厘米长，1厘米宽，0.3厘厚的薄木片线虫分离率最高；40克木样线虫量大，1小时就能获得线虫；制成的木样直接浸泡在改进型线虫分离器与辅垫线虫滤纸或双层纱布有同样的线虫分离效果；木样保存在40C左右的保鲜冰箱中，两个月内样本线虫量无明显变化。

关键词： 木包装 松材线虫 制样 保存

进境木质包装松材线虫检疫工作，在口岸已经开展了近二十年，然而作为一项专门的检疫技术，还缺乏系统的研究。沿袭的技术主要是森林松材线虫的检疫技术，实践证明，两者之间存在很大的差异。如何使口岸木质包装松材线虫的检疫工作迅速准确、又简单易行，我们做了一些初步研究，现将结果总结如下。

1、材料

1.1 供试木样为来自日本的木包装2m3，长为100cm，宽为10cm，厚为0.8cm带有伞滑刃属线虫，每克木样线虫量约70条，试验室温20℃以上；

1.2 线虫分离器采用自制的改进型线虫分离器；

1.3 线虫滤纸采用标准进口线虫滤纸和国产定量滤纸；

1.4 制样工具分别采用：电钻（国产木工钻头、日本产木工钻头）、手工木钻、斧头、锯子、刨子；

2、方法

2.1 电钻制样：用直径为2.8cm、1cm、0.8cm国产木工钻头，直径为1.1cm、0.65cm日本产木工钻头，在同一块木样上分别取样16g。

2.2 手工木钻制样：用直径为2.5cm、3.2cm钻头在上述木块上分别取样16g；

2.3 木工刨制样：用刨子刨取上述钻过孔的木段，取刨花16g，剪成1cm长的小片；

2.4 锯、斧制样：用锯子将上述木段，分别锯成1cm、2.5cm的小段，再用斧头劈成厚约0.3 cm薄木片，1cm长 薄木片分别取样6g、40g；2.5cm长薄木片取样40g； 

2.5 锯未制样：用日产锯锯取上述木段，取锯未16g；

2.6 用进口线虫滤纸、国产滤纸以及直接用改进型线虫分离器，分别放入1cm长薄木片样20g，加水记录时间；

2.7 将上述含有线虫的木包装分别存放：将木样制成长、宽、高约为15×10×0.8（cm）的小木块10块，上喷自来水，套牛皮纸，最后用塑料袋扎紧。其中5块用保温保湿培养箱保存（25℃），另5块存放在冰箱中保鲜（4℃），将剩余的木包装直接堆放在露天货场中（30-42℃），每隔15天分离线虫1次。

2.8 样品除锯屑用双层纱布包裹外，其余均直接放入改进型线虫分离器，加水记录时间，上述所有样品，均做三个重复。

3、 结果分析

3.1 表1.几种制样方法线虫分离数量的比较（样品重16克）

时 间 方 法 1小时 1

2小时 4小时 8小时 2小时

薄木片mm  (108X3)mm 0 100 140 60 10

刨 花 ０ 12 6 &nbs

p; 4 2

锯 未 ０ 1　 2 0 0

国产钻头2.8cm 0 2 1 0 0

国产钻头1cm 0 3 5 1 0

国产钻头0.8cm 0 0 1 0 0

手 钻3.2cm 0 2 4 2 0

手 钻2.5cm 0 3 5 4 1

日产钻头0.65cm 0 8 12 5 0

日产钻头1.1cm 0 14 16 7 2

注：上述线虫数为三次试验平均值。下同。

表2.样品大小与线虫分离数量的比较（样品重数克）

时 间 方 法 1小时 12小时 24小时 28小时 72小时

薄 木 片 1×0.8×0.3（cm 2 130 263 15 7

薄 木 片 2.5×0.8×0.3（cm 13 120 227 44 12

表3.线虫滤纸与定量滤纸分离线虫的效果比较（样

品重线）

时 间 方 法 3小时 12小时 24小时 48小时

线虫滤纸 14 110 120 27

定量滤纸 7 100 120 18 &

nbsp;

直接浸泡 10 90 130 20

注：样本大小为1×0.8×0.3(cm)

表4.不同存放方法线虫分离数量的比较（样品样重6克）

时 间 方 法 初始 15天 30天 45天 60天

自然裸露 30 13 2 0 0

保鲜存放 30 27 25 23 22

保温保湿 30 60 25 15

注：样本15×10×0.8(cm)

3.2 分析

3.2.1 表1所列10种制样方法，经过72小时分离所获 线虫，以薄木片制样法效果最为显著，累计获得的线虫是其它方法的8-310倍。从1小时到72小时5个时间段分离线虫的结果来看，以12-24小时为线虫逸出的高峰期。用薄木片法制样，木质纤维未受到损坏，而其它诸种方法获得的小样，木质纤维不同程度被扭曲，以及干燥磨擦产生高温，对线虫的生存产生了致命的影响。日产木工钻头，以及刨花法制样，由于木质纤维相对受损、挤压相小，线虫量就略大。

3.2.2 表2所列样本长度在1-2.5cm范围内，在12-24小时所获得的线虫量大致相等，在此范围内，线虫逸出与木样长度无关；在样品量40克的情况下，1小时就能获取样木中的线虫；对照表1看出，一定时间内随着样本量成倍增加，线虫逸出量增加，但不呈倍量增加。

3.2.3 表3所列，样品为薄木片，48小时检查线虫时，采用进口线虫滤纸，定量滤纸辅垫与样本直接浸泡获得的线虫量大致相等，且解剖镜下的清洁度也大致相等。在制取薄木片过程中，一些微小的木屑在制作过程中丢失，已很整洁，完全可以省去滤纸或双层纱布，如果要获得与滤纸同样的清洁程度，将薄木片先用水冲洗一下再分离。

3.2.4 表4所列，含线虫的木样自然存放不到两个月，木样中分离不到活线虫；经4℃左右的保鲜保存，两个月内样本中的线虫量无显著变化；25℃保湿条件下，线虫在15天内线虫总量提高，随着时间的推移，线虫量呈下降趋势。木样自然裸露存放，首先是含水量的大量损失，失水到一定限度线虫开始死亡。在保鲜保存的情况下，含水量相对稳定，一定时间内能保持原有状态。线虫在保温、保湿条件下，各方面环境相对适宜能够进行繁殖生长，至于一个月左右线虫量下降，应与线虫所处环境其它制约因素有关，本文不作分析。



4 、讨论

4.1 考虑到取、制样方便、快捷和制成样品的整洁性以及线虫的分离效果，实际检疫工作中，应选取有代表性的木块大样带回实验室，用锯、斧制成薄木片样进行线虫分离，同时用便携式电钻（钻头采用日产木工钻头，直径为11mm）在现场继续钻取有代表性样点2-3，将钻下物带回实验室一并进行线虫分离，此法能够明显提高线虫的检出率。为了加快线虫的检出速度，我们也试验用庶糖法直接分离锯屑里的线虫，整个过程在一小时内完

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